血液系统疾病是一类影响人体血液及其成分正常功能与生产的各种病理状态。探索血液系统疾病的发病机制、寻找更有效的治疗方法以及开发新的预防策略，可为患者带来更长的生存期和更好的生活质。

今天，检验君为大家分享的是上海交通大学医学院附属瑞金医院实验诊断中心王学锋教授团队近年来关于血友病、血栓形成等血液系统疾病的研究前沿。

新型凝血因子IX突变导致血栓形成

血栓性疾病通常由凝血反应的过度活化所引起，这种活化可能由自然抗凝因子的缺乏，或者是抗抑制的凝血因子突变而导致。然而，由具有增加促凝活性的凝血因子突变体引起的血栓形成却极为罕见。

日前，上海交通大学医学院附属瑞金医院实验诊断中心王学锋教授、戴菁教授团队发现了一种新的凝血因子IX（FIX）突变，与血栓的形成有关，并将该突变命名为FIXShanghai II。该研究发表在Blood（IF:20.3）。

该新型突变体在一名年轻男性静脉血栓患者身上所发现，尽管患者的活化部分凝血活酶时间（APTT）和凝血酶原时间（PT）均在正常参考范围内，但其FIX:Ag与正常参考相当，而其FIX:C则约为正常对照的201.69±10.38%。凝血酶生成试验（TGA）显示，与正常对照相比，患者的滞后时间更短，总凝血酶生成（ETP）和峰值均有所提高，表明患者的整体凝血活性增加。

通过FIX:C/FIX:Ag比率测定，纯化的重组FIX-Glu340Lys突变体显示出比野生型FIX高1.82倍的促凝血活性。重组FIXShanghaiII突变体可以像FIX野生型一样被激活的因子XI（FXIa）转化为FIXa。对FIXa催化FX激活的动力学研究表明，p.Glu340Lys突变导致了FIXa加速FX激活。

此外，p.Glu340Lys突变还增强了导致血栓形成的FIX突变体，即FIXShanghai和Padua的促凝活性，其效果与对FIX野生型的作用类似。含有Glu340Lys和Arg384Gln（FIXShanghai）或Arg384Leu（FIXPadua）的双突变体的FIX:C/FIX:Ag比值约为单独的FIXShanghai或Padua的两倍，分别是FIX野生型的11.48倍和22.53倍，比FIX野生型分别高出6.16倍和8.13倍。

总之，该研究不仅为血栓性疾病的病理机制提供了新的见解，也为未来的治疗策略提供了潜在的靶点。

文章链接：

https://ashpublications.org/blood/article/142/Supplement%201/1233/504211/Thrombosis-Caused-By-a-Novel-Coagulation-Factor-IX?searchresult=1

单细胞测序揭示血友病A患者免疫细胞差异性

血友病A（HA）患者体内的FⅧ抑制物是一种能够中和FⅧ凝血活性的抗体，导致出血倾向并预后不良。这些抑制物可能是血友病A患者在接受FⅧ替代疗法后适应性免疫反应的产物，也可能是获得性血友病A（AHA）患者体内针对FⅧ的自身免疫反应产生的自身抗体。先前的研究已经提出了儿童HA患者产生FⅧ抑制物的潜在机制，但不同类型患者对FⅧ的免疫反应仍有待研究。

日前，上海交通大学医学院附属瑞金医院实验诊断中心王学锋教授、武文漫教授团队通过单细胞测序技术深入分析了HA患者及AHA患者的免疫细胞特征，揭示了不同患者群体在免疫反应上的差异性。该研究发表在Blood（IF:20.3）。

该研究从三名AHA患者、三名成年HA患者以及三名产生FⅧ抑制物的儿童HA患者中分离出外周血单个核细胞（PBMCs），进行了单细胞（sc）RNA测序、scBCR测序和scTCR测序。九名患者的47458个PBMCs通过了转录组分析的质量控制，PBMCs被聚类成14个亚型。发现成年和儿童HA患者的免疫细胞亚型分布存在差异。成年HA患者的CD4⁺Th细胞和NK细胞比例较高，而儿童患者的这些细胞比例较低。AHA组中CD4⁺Th细胞的细胞毒性相关基因表达上调，而成年HA患者的某些转录因子上调。T细胞在所有产生FⅧ抑制物的患者中起关键作用。

总之，该研究通过对不同年龄段和疾病类型的患者进行细致的免疫分析，可以更好地理解FⅧ抑制物的产生机制。这些发现不仅为理解血友病的免疫机制提供了新的视角，也为未来的治疗策略提供了重要的科学依据。

文章链接：

https://ashpublications.org/blood/article/140/Supplement%201/8428/491467/Single-Cell-Sequencing-of-Immune-Cells-from?searchresult=1

血管性血友病因子多聚体组装和WP小体储存的结构基础

高分子量血管性血友病因子（VWF）多聚体是VWF发挥生理功能的主要形式。已知VWF前肽（D1D2区）对于VWF多聚体组装及WP小体储存均至关重要，但其作用机制尚未完全阐明。

日前，上海交通大学医学院附属瑞金医院实验诊断中心王学锋教授、病理生理学系周爱武教授团队揭示了VWF多聚体组装和WP小体储存的结构基础和VWF前肽在此过程的模板机制，为2A型VWD的基因治疗提供了新的理论基础和治疗方向。该研究发表在Blood（IF:20.3）。

该研究通过单颗粒冷冻电镜技术，首次获得了高分辨率的VWF头部（D1D2D’D3）形成的管状结构原子模型。研究结果揭示了VWF多聚体组装和WP小体储存的结构基础，并阐明了VWF前肽在这一过程中的模板机制。这一发现不仅为2A型VWD的致病突变提供了分子层面的解释，也为基因治疗提供了新的可能性。

文章指出，VWF前肽在弱酸性环境下通过形成同源二聚体，为VWF多聚体组装及WP小体储存提供模板，从而启动并促进管状结构的形成及进一步的多聚化。这一机制的发现，为2A型VWD患者提供了基因治疗的新策略。通过特异性启动子使VWF前肽在内皮细胞中长期特异表达，有望纠正VWF前肽突变相关2A型VWD患者的多聚体组装障碍。

总之，该研究为理解VWF多聚体组装和WP小体储存的分子机制提供了新的视角，对于2A型VWD的治疗提供了新的思路。

文章链接：

https://ashpublications.org/blood/article/139/22/3314/483983/Structural-basis-of-von-Willebrand-factor

新型非典型剪接变异引发2A型血管性血友病

血管性血友病（VWD）是一种常见的遗传性出血性疾病，是由于血浆中血管性血友病因子（VWF）的数量减少或质量异常而导致，探究其中的机制对理解和治疗血管性血友病至关重要。

近日，上海交通大学医学院附属瑞金医院实验诊断中心王学锋教授、武文漫教授与上海市临床检验中心胡晓波教授团队在2A型VWD患者中发现了VWF前肽编码区非典型剪接受体的新型变异位点（c.875-5T > G），可通过严重损害VWF多聚体组装和WP小体储存，引发2A型VWD。该研究发表在ThrombosisResearch （IF:7.5）。

为了分析c.875-5T>G变异对剪接的影响，研究人员从患者的外周白细胞和血小板中获取了VWFmRNA转录本。通过在AtT-20细胞中进行体外表达研究，进一步分析了该变异对表达和多聚体组装的影响。通过免疫荧光染色和电子显微镜技术，评估了VWF突变体的细胞内处理以及WP小体的形成。

mRNA转录分析显示，c.875-5T>G变异导致外显子8的跳跃和VWFD1结构域中41个氨基酸的框内缺失（p.Ser292_Glu333delinsLys），产生了一个截短的前肽。与患者的实验室表现一致，转染了突变体的AtT-20细胞分泌的VWF较少，条件培养基中的VWF抗原水平为野生型的47%。在培养基中几乎完全丧失了中等分子量VWF多聚体（IMWMs）和高分子量VWF多聚体（HMWMs），并且细胞中WP小体的形成受损，表明截短的VWF前肽失去了对VWF多聚化和管状储存的伴侣样功能。

总之，该研究发现VWF剪接受体位点变异（c.875-5T>G）可导致前肽截短，严重损害VWF多聚体组装和WP小体储存。这一发现对于理解和治疗2A型VWD具有重要意义，也为未来的治疗策略提供了新方向。

文章链接：

https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0049384824000379

新型GATA1变异体导致促凝血小板形成缺陷

在血液系统发育中，GATA1作为主要的转录因子之一，对巨核细胞的分化和成熟起着至关重要的作用。以往的研究表明，不同GATA1变异体与不同程度的大细胞性血小板减少症和血小板功能障碍有关。

近日，上海交通大学医学院附属瑞金医院实验诊断中心王学锋教授、丁秋兰教授，上海交通大学生命科学技术学院徐沁教授团队的一项研究表明，新型GATA1变异体（p.G229D）可能导致一种以促凝血小板形成和功能缺陷为特征的血小板表型，该研究扩展了与GATA1变异体相关的血小板疾病范围。该研究发表在ThrombosisResearch（IF:7.5）。

研究人员在复发性创伤性肌肉血肿患者中发现一种新的GATA1变体（c.686G>a，p.G229D），并对该患者的血小板进行全面表型分析。分别用流式细胞术和凝血酶生成试验（TGT）检测促凝血小板的形成和功能。通过qPCR和蛋白质印迹检测ANO6的表达。用Fluo-5N荧光法检测细胞内钙离子的超分子通量。

结果发现，患者表现出轻度的大细胞性血小板减少症，并且血小板颗粒、聚集和整合素αIIbβ3激活存在缺陷。在凝血酶和胶原刺激下，患者的促凝血小板形成百分比低于健康对照组。患者的富含血小板的血浆中凝血酶生成显著减少。ANO6的表达和细胞内钙离子流动受损，加上患者血小板颗粒异常，可能导致促凝血小板功能缺陷。

总之，该研究进一步了解了GATA1变异体在血小板功能障碍中的作用，这一发现不仅丰富了我们对血液疾病机制的认识，为未来相关疾病的诊断和治疗提供了重要的科学依据。

文章链接：

https://www.thrombosisresearch.com/article/S0049-3848(23)00361-4/fulltext

新型突变引发IIb蛋白C缺乏症

蛋白C（PC）是一种依赖维生素K的抗凝血酶原，通过血栓素-血栓调节蛋白（TM）复合体激活后，通过有限的蛋白水解作用降解凝血因子Va和VIIIa，从而调节凝血级联反应。

近日，上海交通大学医学院附属瑞金医院实验诊断中心王学锋教授、陆晔玲教授团队在蛋白C的关键抗凝血蛋白基因中发现了一种新的突变p.Ser252Asn（S252N），该突变引入了一个额外的N-连接糖基化位点，并导致IIb型蛋白C缺乏。该研究发表在Thrombosisand Haemostasis（IF:6.7）。

为了揭示这种突变的分子基础，研究人员在哺乳动物细胞中表达了PC-S252N突变体，并通过凝血实验对其特性进行了表征。结果发现，PC-S252N的TM结合能力减弱，导致其通过血栓素-TM复合体激活的过程受损。然而，APC-S252N对显色底物的裂解能力略有增强。同时，APC-S252N对FVa的催化活性显著降低。

序列分析揭示，Ser252到Asn的替换在PC的催化域引入了一个新的潜在N-连接糖基化位点（²⁵²NTT²⁵⁴），这对PC的活化过程和APC的抗凝血活性产生了不利影响。这种结构上的改变对蛋白C的TM促进激活和APC对FVa的裂解都有负面影响，最终将导致患者出现血栓。

尽管该研究揭示了蛋白C缺乏症的部分分子机制，但仍需要进一步研究以充分理解这种突变的含义以及解决办法，防止蛋白C缺乏患者的血栓形成。

文章链接：

https://www.thieme-connect.de/products/ejournals/abstract/10.1055/s-0043-1777133#FN23050211-1

专家简介

王学锋教授

上海瑞金医院主任医师，教授，博士生导师,上海交通大学医学院医学技术学院副院长, 检验系主任，附属瑞金医院实验诊断中心主任，检验科主任，临床输血科主任。

上海市领军人才、上海医学会检验分会主委、全国临床输血委员会副主任、中华医学会检验分会血液学和体液学学组副组长。

长期从事出血病及血栓病诊治的研究，对各种出血病尤其是严重的出血的诊断与治疗有较丰富的经验。

王学锋教授：血友病、血栓病等血液系统疾病研究前沿